隨著疫情的升溫,每天下午公布的確診人數也是全國人最關注的焦點。然而最近因為檢驗量大增,醫檢師和儀器無法在一天跑完所有檢體,造成時常有「校正回歸」情形發生。這也讓許多人不諒解,懷疑「篩檢為何那麼慢?」。
然而「檢驗流程」並不像我們想像的那麼簡單!近期就有位在長庚醫院任職的醫檢師助理張郎,在自己的臉書上發文公開核酸檢測(PCR)的詳細程序,居然多達20幾個繁瑣流程、驗一個要按288次、甚至得在0.3公分的小孔洞中尋找病毒!做完一個,手指也被手套中的水氣泡爛了,只盼酸民能尊重專業、多多鼓勵、不要再裝懂說風涼話。
貼文也引起近2萬名網友按讚轉發,紛紛留言表示敬佩,「原來不是放進機器就好...」、「我懂為什麼快不起來了」,一起來看看吧!
#篩檢不是「放進儀器就好」
大家平時去一趟檢測站、等一到兩天就出來的檢驗報告,背後的檢驗過程其實非常繁瑣且複雜!不僅要耗費腦力之外,更要靠眼力以及手力,慢慢從中找出病毒。
圖片來源:臉書張郎(Loe Chang)授權
「從病人身上找到呼吸道病毒的基因體有多難呢?說穿了也不是很難 ,比驗孕稍微難一點而已」
張姓醫檢助理分享,從鼻腔取出檢體後,要先加入化學物質將組織分解,手工搖勻成乳糜狀之後離心,讓檢體呈現三層分離。繼續抽取、離心、靜置之後會得到沉澱物RNA樣本,但這個RNA樣本含有許多雜質,包含環境細菌、病人身體中的、病毒的、死掉的細胞。
為了分離掉各種雜質,隨後要繼續「加入化學物質、搖勻、靜置、抽取需要的成分、回溶、風乾、染色」等,不斷重複上述步驟無數次,直到找到最重要的「Ct值(cDNA被酵素放大的次數)」數據為止。每個步驟都要謹慎,不能抽取到其他雜質,手一抖就可能前功盡棄。
#「為何找新病毒株這麼慢?」
圖片來源:臉書張郎(Loe Chang)授權
他解釋,分離病毒株需要藉由許多分層離心的梯度,分出來的每一個濃度梯度都可以做一次樣品的採樣。「檢驗人員的大拇指加一次樣品要按96次」,「一個樣品有三種東西,總共要按288次」」。一整天下來拇指不斷按壓,就算沒抽筋也十分痠痛。
接著要將病毒樣品放在在約0.3cm的銅網上,烘乾一天。如果病毒太小就得做染色。再以電子顯微鏡,在銅網中的300個洞中找到病毒。知道敵人是誰後,再進行蛋白質晶體繞射,找到推測的蛋白質結構、進行基因定序,最終,才能判斷「這是什麼」。
#大家以為沒什麼,背後的辛苦卻無人知!
圖片來源:臉書張郎(Loe Chang)授權
醫檢師助理張郎最後也表示,「如果你看完了,謝謝你,因為你知道為什麼這麼慢了,沒看完沒關係,因為你永遠不會懂我們多無奈」,做完一系列的步驟之後,手套戴了整個下午,因為長時間水氣都悶在裡面,幾乎就要「泡爛」!但好不容易做完一輪以為能休息時,並沒有!背後還有成千上百個需要他們繼續採檢,一天得重複上面動作超過10次。回到家看著電視,卻聽見許多人的責怪他們驗太慢,這讓他們難免灰心。
如果看不懂沒關係,他表示「那請你乖乖在家,除了別亂跑,記得給我們一點鼓勵,不要以為你都懂,其實你知道的真的比你想像的還少」。
看完上面醫檢助理的分享,不少網友都表示非常敬佩。不要外出趴趴走就是最好的幫助!看到為了我們而守護在前線的醫護人員,每天辛苦暴露在高風險的環境下,請一定要給他們一個鼓勵!
最後我們來看看他分享的詳細流程吧,小編看完真心跪了,專業無價,我們一起獻上尊敬!
#鼻腔採檢完後的20個步驟
1. 加入Trizol reagent把組織分解後,以1/5的比例加入chloroform
2. 搖勻呈現乳糜狀後,13500g攝氏4度離心15分鐘後,呈現三層分離
3. 最後非常仔細小心地取出上層透明的部分
4. 再加入等體積的isopropanol
5. 搖勻後,攝氏4度靜置五分鐘
6. 13500g離心十分鐘
7. 得到沉澱物即為total RNA 樣本(包括環境細菌的、你身體的、病毒的以及死細胞的)
8. 為了去除殘留的isopropanol,chloroform,需加入75%乙醇(in DEPC-double_Distilled water , ddH2O))
9. 並搖晃使沈澱物飄起
10. 再以13500g攝氏4度,離心五分鐘(重複上述步驟兩次)
11. 最後風乾後以DEPC-ddH2O回溶
12. 最後在nano-drop測定RNA concentration (一個sample大概五十分鐘,當sample量變成16個時,會變成1.5小時)
大家看到這邊是不是已經進入到異次元世界了!但是接下來的步驟又更關鍵,一定得小心翼翼耐著性子做!
圖片來源:臉書張郎(Loe Chang)授權
13. 由於RNA樣本是各種奇怪RNA,又怕殘留DNA,所以必須事先加入 DNase-I,去除DNA
14. 並為了避免RNA損壞,要額外加入RNase inhibitors
15. 隨後將RNA以反轉錄的方式,變成互補DNA(complementary DNA)
16. 約需要200 ng~1000ng的總RNA
17. 歷經一個小時的Reverse transcriptase PCR的努力,將RNA全部變成cDNA,再將cDNA稀釋成5~15 ng/ul(你沒看錯~就是千分之一毫升)
18. 最後把cDNA樣品放入第一張圖的白盤中,白盤在共有96格(約12*8公分)
19. 接著與病毒基因體的引子(primer)與SYBR-green(螢光探針-聚合酶複合物)混合,總體積約10~20 ul ,所以他的滴管也非常的小(如第二張圖)
20. 之後需要1.5小時的時間 進行35~40重複的PCR program
圖片來源:臉書張郎(Loe Chang)授權
21. 將病毒樣品放在約0.3cm的銅網上烘乾一天,就是中間那顆小水滴(如上上圖)
22. 如果病毒太小就得用UA(Uranyl Acetate)做染色
23. 之後以穿透式電子顯微鏡在銅網中的300個洞中找到病毒
24. 知道敵人是誰後,再進行蛋白質晶體繞射,找到推測的蛋白質結構,進行基因定序
25. 確認結果
圖片來源:臉書張郎(Loe Chang)授權
本文感謝 張郎(Loe Chang) 授權